中国一流的离心机生产企业
专注生物医疗、实验室离心机

分离细胞的梯度介质和梯度类型

用来分离细胞的梯度介质和密度梯度的制备受很多条件的制约,理想的梯度应满足以下条件:

    ①对细胞无毒;

    ②能形成具有足够密度的等渗介质;

    ③不渗入细胞;

    ④分级分离后容易从细胞中除去;

    ⑤形成梯度的黏度低。

目前,用来分离细胞的梯度介质主要有Percoll、Nycodenz、Metrizamide、Ficoll和血清蛋白等。本站大部分列举的实例中基本包括单独使用这些梯度介质或者使用两种介质组成的混合物,它们都在分离哺乳细胞中广泛应用。Nycodenz与Metrizamide性质类似,但Nycodenz在实践上更具优势(可以高压消毒,与细胞不发生相互作用),它是用于分离细胞比较理想的碘化梯度介质。

用来分离细胞的密度梯度形状各种各样,可以是连续梯度,也可以是不连续梯度,可以使用特殊梯度,如等动力梯度、等体积梯度、指数梯度和对数梯度。

在密度梯度上分离细胞时要特别注意梯度的渗透压,整个梯度的渗透压变化不应超过10%,以防止细胞在通过梯度时由于渗透压改变产生溶胀或收缩,改变它的沉降行为,导致最终反映出来的不是细胞本身的大小和密度。

用梯度形成仪制作梯度时,一开始就用两种等渗溶液易于获得均匀渗透压。不连续梯度或者用不连续梯度通过扩散产生的连续梯度有局部渗透压改变的可能性,原因在于形成密度梯度的溶质的扩散特性存在差异,为了维持渗透平衡,常加入NaCl。离心机厂家:英泰仪器 www.ytyq.com)

使用腔态二氧化硅化合物(例如Ludox和Percol)的突出优点是它们通常在大浓度范围内渗透性改变很小,但在用离心法自形成梯度之前加入终浓度为0.9%的NaCl便可以方便地制备出稳定的等渗梯度。