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血液分离的采血工作流程以及使用器材

本文主要介绍了利用离心机进行进行血液细胞分离前的采血作业流程、器材试剂以及注意事项,给界内需要的朋友做参考。分离过程中需要使用离心机欢迎咨询英泰仪器!

(一)材料与试剂

1.抗凝剂
(1)肝素:肝素是含硫酸基的粘多糖,常用其钠盐或钾盐,它能阻止凝血酶原转化为凝血酶,进而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白,从而阻止血液凝固。常用的肝素溶液浓度为1 000U/ml,市售肝素多为100U~126U/mg。
(2)乙二胺四乙酸(EDTA):是一种螯合剂。用生理盐水配制成4%的溶液备用。
(3)阿氏液(Alsever液),配方如下:
  枸橼酸钠(Na3C6H5O7·5H2O)      0.80g
  枸橼酸                            0.0325g
  葡萄糖                            2.05g
  氯化钠                            0.42g
  蒸馏水       加至                  100.00ml
混匀溶解后,114.3℃高压蒸汽灭菌10min备用。
阿氏液中既含有枸橼酸钠抗凝剂,又含有细胞生存的营养,所以它既可做抗凝剂,又可做血细胞的保存液。
2.针头  根据不同动物和采血部位,采用不同型号的针头,用前必须灭菌或消毒。
3.采血容器  注射器或三角瓶等。
4.采血动物。

(二)操作方法

1.采血法  各种动物采血方法不一。马、牛、羊等大动物一般从颈静脉采血,猪从颈静脉、前腔静脉或耳静脉采血,家禽由翼下静脉或心脏采血,兔由心脏或耳静脉采血,犬由颈静脉或四肢静脉采血,豚鼠由心脏采血,小白鼠则可断尾或剪断腋下血管或剪断眼球采血。
2.抗凝  采集血液最关键的问题是抗凝,采用什么方法进行抗凝,则根据实验的要求和条件而定。最常用的方法如下:
(1)肝素抗凝:采血时,使每ml血液含15U~20U肝素即可。计算采集的血液量,按1 000U/ml的量加入肝素,直接放入采血容器中,采血时,边采血边轻轻摇动,使抗凝剂和血液混匀。对于采少量的血液或小动物采血,可直接用注射器抽取一定量的肝素液,再采血直接抗凝。
(2)EDTA抗凝:采血前,用灭菌生理盐水将EDTA配制成4%溶液,然后按预采血液的量,以每ml血液加入1mg~2mg的EDTA的液体量于采血容器内。采血,并不断摇动采血容器,使之混匀。
(3)玻璃珠法:预先将适量的玻璃珠(根据采血量多少而定)清洗后,装入采血容器中,灭菌后备用。采血过程中,边采边摇采血瓶,以使小玻璃珠在血液中滚动,以机械地除去纤维蛋白,使血液不能凝固。本法虽较麻烦,但对淋巴细胞的活性影响最小,且可减少血小板的混杂。
(4)阿氏液采血:以阿氏液和采血量以1︰1比例采集血液,边采边轻轻摇动采血瓶,使之混匀。用阿氏液采血,除了抗凝外,多用于红细胞的保存。一般在4℃条件下,阿氏液中保存的红细胞2周其活性和特性不变。