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三种定位区带收取进行梯度回收的方法


管侧穿刺法

该方法使用的条件也是需要能用肉眼观察到,或通过物理、化学方法处理可以确定样品区带的位置与区带宽度。使用注射器针头在紧靠区带的下沿处穿刺,使针头进人离心管内,从区带下沿开始逐渐抽取,收集样品区带。这种方法可以减少样品收集时被污染及与空气接触引起的氧化等影响,但要使用一次性离心管,要使用专用固定装置(图4-16)。

定位区带收取方法

底部穿刺法

经过离心颗粒区带移动到离心管底部,用针头在管底中部穿刺——小孔[图4-17(a)],梯度液与颗粒区带依次流出;对收集有梯度液的各个离心管进行检测。这是一种使用较早的老方法,收集的效果并不好。原因是管子在被穿刺时,针头周围有可能产生裂缝,穿刺孔的大小无规则,滴液速度不易控制,颗粒区带之间很容易产生交叉污染。特别在复杂体系的分离中,各区带中颗粒下流速度不能控制,容易产生混合。可采用将离心管口封住,通过一储液腔用油或轻、稀溶液补偿滴下的液体,可保持流速稳定,降低混杂,但手续烦琐费事。另外,该方法中离心管一次性使用增加了成本,也限制了它的使用。

区带切割法

本方法同样需要确定经过离心后样品区带在离心管中的位置;然后把离心管冷冻,对冷冻结冰的离心管用切片仪进行切片,使用该方法需要各有专门的离心管切片机,如日立公司的TSU-2型离心管切割机。该类方法操作复杂、费时,使用时破坏离心管,成本高,除非特殊需要,一般国内很少使用。