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梯度区带的连续收取法进行梯度回收的三种方法

下部抽取收集法

下部抽取收集法操作比较简单,易于在普通实验室广泛使用。使用时,将经过离心机离心分离的离心管固定在专用管架上(图4 18),离心管口装上专用梯度液吸取盖帽,并固定好,通过盖帽将针头式吸管插到离心管底部,固定针头的另一端接上硅胶管,通过泵(或蠕动泵)就可以把离心管内的梯度液连续抽出[图4-17(b)],硅胶管的一端接上专用检测仪器就可以连续流动检测,扫描记录寻找样品峰的位置,并进行部分收集。

一般超速离心机附件中均配有样品抽取的专用附件,如果配紫外流动监测仪,蛋白、核酸检测仪等检测设备,使用起来就十分方便。使用该方法的最大问题是样品液在管道中流动时有些颗粒有附壁作用·造成样品峰的失真。

梯度区带的连续收取法

顶托替代上部收集法

该方法使用的条件也是需要使用超速离心机配置的样品抽取专用附件,将离心管固定在专用管架并密封好(图4-18)。通过管帽把长针插入到离心管底部,将配制好的高密度(一般用66%蔗糖液)衬液(由蠕动泵)注入离心管,将原有梯度液向上顶托;从离心管上部较轻的梯度液开始逐步莲续通过专用盖帽上的出口,平稳地排出[图4-17(c)]。这种用重的衬液(蔗糖储备液)逐步向上替代原有梯度液柱的方法排出的颗粒区带比较稳定,但仍存在有“紊流”及“附壁”作用的影响。

上充替代底部收集法

与顶托替代上部收集法相似,不同的是通过离心管专用盖帽给梯度顶部泵入空气或轻的液体,如液体石蜡油,梯度柱在压力作用下通过插入的针头排出(图4-19)。

液面跟踪法

梯度液的吸取是从梯度液顶部开始,由液面检测器控制吸头自动跟随液面逐渐下行连续吸取。如用日立DGF-U型梯度仪。