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台式离心机分离β-胡萝卜素实验

    一、实验目的与要求


    叶绿素厂在提取叶绿素后的废液小含有一定量胡萝卜素,而且由于叶绿素被提取。所以在利用台式离心机分离胡萝卜素时.可以减少叶绿素对胡萝卜素的干扰。因此,这是比较好的提取胡萝卜素的原料。胡萝卜素常用的分离方法是氧化铝柱层析。


    要求学习学握氧化铝柱层析、台式离心机分离的原理和方法以及胡萝卜素台式离心机分离的条件和方法,学习台式离心机分具体操作。


    二、实验材料

    叶绿素厂废液、石油醚、层析用氧化铝、丙酮、乙醇、环己烷。


    三、实验器材

    台式离心机、离心管、天平、灰化炉、玻璃棒、玻璃层析柱、分液漏斗、紫外可见光分光光度计。


    四、实验内容


    1.废液的预处理

    取叶绿素厂废液5mL于离心管中,置于台式离心机中,进行平衡操作后,1000 r/min离心15min。取上层黄色液体于50ml梨形分液漏斗中。加25ml石油醚(沸程为30一60℃),充分混匀。


    2.氧化铝层析柱的准备


    取100g氧化铝于灰化炉中加热至400℃,保持3h,使水分完全蒸发成活性氧化铝。此时

的氧化铝为Ⅰ级,适当吸收空气中的水分(约3%)后,成Ⅱ级,然后,用石油醚将活性氧化铝调

制成糊状,备用。另取1支20 mm×300 mm的玻璃层析柱,关闭阀门,加入三分之一体积的石油醚、再将糊状的话性氧化铝慢慢地加入到玻璃层析柱中,同时打开层析柱的阀门,让中中的石油醚慢慢地流出,有利于氧化铝的沉降。当氧化铝装至层析柱的8D%时,停止加氧化铝,待氧化铝完全沉降。


    3.加样层析和洗脱

    装好层析柱,同时打开层析柱的阀门和分液漏斗的阀门,使分液漏斗中的样品慢慢地加入到氧化铝层析柱中。观察氧化铝由于加入样品后颜色的变化。当前沿的颜色伸展至柱高度的二分之一时,关闭分液漏斗和层析柱的阀门,停止加样。另取1个250mL分液漏斗,内装石油醚:丙酮=9:l的混合溶液作为洗脱剂,安装好层析装置,分别打开分液漏斗和层析柱的阀门,让洗脱剂慢慢流经层析柱。当颜色前沿到达层祈柱底部时,注意观察并记录色带的分离情况。第一条带(从底部往上数),是α-胡萝卜素,第二条带是β-胡萝卜素,第三条带是γ—胡萝卜素,再往上是其他类胡萝卜素及其他色素。本实验要求收集β-胡萝卜素组分。用50mL烧杯收集β-胡萝卜素洗脱液。


    4.沉淀

    将洗脱液于50℃水浴中加热使溶剂挥发.然后,在残留物中加氯仿使之溶解后再用乙醇沉淀,如发现有白色沉淀物质产生,需用离心机,控制转速在2000r/min状态下进行离心将其去除。在上清液中再加乙醇,得到的棕褐色沉淀,即为β-胡萝卜素。称量,记录总重量。