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离心机转速对MDA-MB-453人乳腺癌细胞分离效果影响分析

由于乳腺癌患者中存在雌激素受体(estrogen receptor , ER)阳性(ER +)和阴性(ER -)两种类型 , 人乳腺癌细胞株 M DA-MB-453(ER -,HER2-hig h)为常见乳腺癌细胞株 ,此细胞株在癌症的机制和治疗研究中具有重要意义.在细胞培养过程中 ,癌细胞与培养液呈悬浊液状态,将此细胞株与培养基进行分离 ,对于进一步的实验研究至关重要.

本实验是利用离心机在一定范围内的不同转速对细胞悬液进行胞液分离, 从而比较不同转速下的分离效率, 找出分离效率较高的转速,以及离心速度与分离产量的规律 ,从而对生物学实验起到指导作用.

材料与方法

当含有细胞的悬浮液静置不动时 ,由于重力场的作用使得悬浮的细胞逐渐下沉, 反之密度比液体小的粒子就会上浮.物质在重力场下移动的速度与大小、形态和密度及液体的黏度有关.悬浮粒子在重力场中运动问题的研究多有报道,而悬浮粒子在离心力场中的分离行为研究的较少.为了能够人为控制悬浮液的分离速度, 以达到最佳分离效果, 人们通过离心机旋转时产生的惯性离心力代替重力, 对悬浮液进行分离.例如,当转速为 1 000 r/min 时 ,在离心机里会产生大约1 .5g ~ 2g 的离心加速度(g 为重力加速度).

根据离心机最大转速的不同 , 离心机分为低速、高速、超高速离心机(http://www.ytyq.com/lixinji/gaosu-lixinji/)等 .不同转速的离心机又适用于不同的分离方法 ,但是他们的原理是大致相同的.由于细胞在高转速下膜会破碎 ,用离心机分离细胞悬液中的细胞 ,一般选择在较低转速下分离.


不同转速时分离细胞情况

不同转速时分离细胞情况

各转速分离细胞数

各转速分离细胞数

实验结果

细胞状态:对细胞离心前后的形态进行观察 ,发现细胞没有受到机械性损伤 ,状态正常 .在此之后做了验证性实验, 证明在 600~1200 r/min 转速下分离的细胞都可继续传代培养,长势良好.

细胞计数:取较清晰的细胞计数板进行拍照,图1(a)~(c)分别为转速为600,900,1200r/min时的细胞状态,具体各转速计数结果见表1.