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翻袋式离心机在VB21细胞收集上的应用研究

丙酸菌厌氧法是目前国内生产VB12的主要方法之一,生产过程中从发酵液中收集细胞采用板框过滤。由于发酵液粘稠且成分复杂,存在滤速慢、收率低、杂质包埋、批次间差异大等问题,是制约V1B2生产水平提高的主要因素。德国海因克尔公司生产的翻袋式离心机具有分离因数高、运行平稳可靠的优点,主要用于终端产品的过滤分离。但用于细胞分离方面未见报道,本实验对这种离心机用于VB12细胞收集进行了研究。

1材料与试验方法

1.1材料VB12发酵液;去离子水;其他试剂为分析纯。滤布。

1.2仪器设备翻袋式离心机;高效液相色谱仪、红外水分天平;电子天平;秒表;量筒等。

1.3实验方法及操作

1.3.1方法将VBI泼酵液计量体积,用翻袋式离心机过滤收集细胞,将细胞破壁检测VB12含量以计算过滤收率。

1.32操作步骤检查离心机确认完好后装好滤布。取处理好的发酵液精确计量体积并测定VB12含量。开启翻袋式离心机,在转速2500r/min下缓慢加人VBI拨酵液,收集滤液填人离心机至滤液完全澄清透明。连续加人发酵液,离心至无滤液流出。降低转速,缓慢加水浸洗滤饼,提高转速甩至无滤液流出。低速转动下将离心机的滤袋推出,提高转速甩出滤饼收集,停机。计量滤饼重量。同时收集滤液,计量滤液体积。分别送样测VB12含量及滤饼含水量。连续处理5批,与同批次生产中板框过滤进行比较。全过程记录每步操作时间,试验结束后计算滤速、收率。

1.4检验方法

1.4.1精密称取收集的VB12细胞,水解破壁用氰化钠转化,以高效液相色谱仪进行检测。色谱柱:Cl:,5林m,250~,流动相:乙睛2%磷酸二氢钠缓冲液=20:80,保留时间6.4min。

1.4.2精密称取收集的VB12细胞,用红外水分天平称重后红外加热至恒重,记录加热前后重量。1.5计算方法收率=(滤饼中VBI摘量x滤饼重量)(/发酵液中VB12含量x发酵液体积)滤饼含水量二(加热恒重前滤饼重量一加热恒重后滤饼重量)/加热恒重前滤饼重量。

1.5计算方法

收率=(滤饼中VBI摘量x滤饼重量)(/发酵液中VB12含量x发酵液体积)

滤饼含水量二(加热恒重前滤饼重量一加热恒重后滤饼重量)/加热恒重前滤饼重量

2结果

2.1收率

用翻袋式离心机(http://www.ytyq.com/)处理滤液与生产中板框过滤的同批次发酵液比较收率结果,如表1所示。

翻袋式离心机与板框过滤收率比较