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80%的实验人员都没有真正明白的Western blot电泳的电路原理

Western blot电泳的电路原理


在科研狗的Western blot讨论群中,有位同学提出了如下非常深刻和有水平的问题:


“WB跑成这样,是怎么回事?(图片见上)”


一看到有人提问,群里的各路英雄好汉摩拳擦掌,准备一展身手。


“有可能是胶没有凝固均匀”

“有可能是电压不稳定”


大家中说纷纭,纷纷出谋划策。经过长达10个小时的激烈讨论之后(有那么久吗?不就10分钟不到),大家终于得出一致结论:


内槽漏液了


那么今天科研狗带大家来看下内槽是如何漏液的。


首先,解释内槽是如何漏液的我们先来看下WB的相关知识,下图是比较常见的电泳芯。注意图中红色线条黄色线条是装置上面的电极丝位置示意图。

Western blot电泳的电路原理

接下来我们看下电泳是如何进行的,下图是切面图:

Western blot电泳的电路原理

正常情况下,内槽中的电泳液是高出玻璃短板的,因此电路回路中,电子e从负极出发,上升到上面,然后通过WB的聚丙烯氨凝胶,回到外槽液体中的正极,因为蛋白质带负电,所以也按照电子的行进路径移动。


那么如果内槽液体不够会怎样呢?

Western blot电泳的电路原理

如上图所示,内槽液体低于玻璃短板之后,电路回路被阻断,因此没有电流了,蛋白也就不跑了。


“我内槽液体明明一开始就加满的,它是怎么漏下去的呢?”


接下来我们看下Western blot的电泳装置:

Western blot电泳的电路原理

注意上图中红线所指的区域,有一个橡胶垫,橡胶垫的结构从侧面看如上面有图所示。然后漏液的真谛就在下图:

Western blot电泳的电路原理

我们在安置胶板的时候很可能忽略了上述的问题,没有将胶的玻璃短板紧紧接触橡胶条,因此液体就慢慢从玻璃短板两端漏到外槽中,致使内槽中的液体不足,使得电回路断开。

在这里科研狗有一个经验是,在将两块胶板贴合在电泳芯中然后准备夹紧的时候在玻璃胶板的底部往上抵,这样就不会出现上面那个小缝隙了。


那么问题又来了


“为啥这个是斜的呢?”


Western blot电泳的电路原理

很简单,桌面或者胶板不水平,左边高右边低,漏液的过程中,左边首先没有了液体,然后停止了跑动,从左往右慢慢没有了液体,因此是一个左高右低的斜线。

(本文来自微信公众号:科研狗。由英泰离心机整理发布)