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分离嗜酸和耐酸链霉菌的试验基本理念介绍

链霉菌不仅能产生各种抗生素,还能产生其它各种蕴藏着巨大社会和经济价值的代谢产物,如各种酶,酶抑制剂,稀有氨基酸,多糖复合物等等。由于新的种类的微生物的发现往往意味着新的活性物质的发现,对非常见链霉菌(~一sterptolynceet,)的分离也就为寻找和发现新的活性物质的提供了机会l[]。在以往的研究中,人们对链霉菌的注意力主要集中在中性链霉菌上,即生长范围在pHS.0一9.0,最适酸碱环境为中性的链霉菌。其实,自然环境中尚存在着其他许多未为人知的链霉菌。最近,英国&旧山免llow等人报道了新的链霉菌类群:生长范围在p3H.5一6.5,最适pH为4.5一5.5在基因进化树上能形成单独的分支的嗜酸链霉菌,和生长范围在pH4.5一7.5之间;最适pH为4.5一5.5的耐酸链霉菌。


嗜酸链霉菌在酸性环境中普遍存在,尤其是在土壤中。它们所产生的几丁质酶和淀粉酶的最适反应pH都低于中性链霉菌所产生的酶。其数值分类表型特征也与中性链霉菌有着显著不同。嗜酸性链霉菌是极具潜力的抗真菌素的产生者川,在酸性土壤有机物的代谢循环中起着非常重要的作用。因此,分离嗜酸链霉菌,研究嗜酸链霉菌的生态,对于寻找和发现天然产物有相当大的意义。


然而,在天然产物的筛选过程中所使用的大多是沿袭了很久的传统技术,如直接洒土法,平板系列稀释法等等。长期的沿用和不加创新,造成了分离菌种的种类单一,效率不高,重复分离过多,严重地影响和制约了新的生物活性物质的筛选。


链霉菌有着发育良好的菌丝体,作为优势菌群定居在土壤中,与土壤有着这样或那样的作用。一方面土壤颗粒的集结会把微生物包裹在里面,分离的时候接触不到培养基表面,不能生长,于是无法分离出来;另一方面,发育良好的菌丝体又增加了土壤颗粒集结的力度,使土壤颗粒更加不易分散。只有打破土壤团粒,将颗粒内与之胶联的菌丝体释放出来,才能使土壤和菌体均匀地分散到溶液中去。科学家们为提高放线菌天然产物的筛选效率,开展了从自然生态环境中选择性分离放线菌的分离技术的研究。曾经采用的方法有缓冲液稀释法,鳌合树脂法,分选法闭和超声波法。本实验结合了以上各方法的主要特点,采取了一个综合的土样处理过程,称为分散和差速离心法,在这一方法中,综合运用物理和化学手段,如混合振荡、温和超声波处理、化学震惊等不同程度不同方式地破坏土壤团粒的聚集,使微生物释放出来,通过细度分选分步收集、接种,将土壤中混生着的微生物有效的分离开来。该研究通过对酸性土壤中嗜酸和耐酸链霉菌的选择性分离实验,来评价DDc方法的实用性。