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TG16台式高速离心机分离提纯烟草花叶病毒

    在进行植物病毒材料的研究少不了对含病毒样品的离心提纯过程,这个过程中如需实现对病毒进行研究样品量最少要求在50g左右,如果需要制作抗原,样品量也就必须加大,最少要400g,离心力在10000×g以上。

    离心实验过程我们可以通过英泰TG16台式高速离心机来实现,该机器可适配最大制备容量为4×100ml,最大离心力为14850×g的角转子,稳定性和分离效果好,能最大程度上满足实验的需求。今天我们利用TG16离心机对烟草花叶病毒样品进行分离提纯。

    这类病毒在受侵叶中的含量很大(10-20mg/g 叶组织,而且病态很稳定,易于提纯。然而从严格的角度来看,这类病毒反而难于提得很纯,或得到十分理想的结果,因为杆状的粒休易于首尾相接。粒体的长度往往受到缓冲浪的影响。下面介绍通过TG16台式高速离心机分离提纯烟草花叶病毒样品,此实验可以在室温下进行。

    1. 制作样品溶液:在0.5MNa2HPO4KH2PO4B.S.(pH7.2)+1%2巯基乙醇(每ml 缓冲液对应1g组织)研碎。

    2. 研碎的样品用四层纱布进行过滤,残渣使用拧纱布的办法拧出汁液。每100ml抽液中加8ml n-J醇搅拌15分钟。

    3. 初次离心:将搅拌后的抽液弃去沉淀,盛入通过TG16离心机离心管中,10000×g进行离心。

    4. 再次离心:每100ml上清液中加4g PEG (分子量6000)使其溶解弃去上清液,再次用TG16离心力为10000×g离心15分钟。

    5. 第三次离心:淀积物溶于0.0lM PBS*(pH7.2)按原液每100ml加20ml,弃去沉淀,按原来离心力再次离心15分钟。

    6. 第四次离心:按上清液每10ml中加入0.4g的NaCl及PEG;随加随搅使其溶解,弃去上清液,离心15分钟。

    7. 第五次离心:按原液每100ml用2ml0.01M 磷酸缓冲液将沉淀物溶解,弃去沉淀,离心15分钟后倾出上清液。 

    倾出的上清液即为纯度较高的烟草花叶病毒溶液,离心提纯过程就完成了,实验室人员就可以对其进行后续的研究或者制作抗原的操作。