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差速离心在叶绿体以及病毒分离的应用

    差速离心可分为回收沉淀的离心、回收上清液的离心以及全周期性离心。其是利用样品中各个组分大小和密度来实现操作,对于不同的样品选择不同的回收方法。差速离心在前面有介绍,就不赘述了。差速离心具有方法简单等特点,虽然缺点很多,比如离心纯度不高、离心效果受外界因素影响大,但是其应用非常广泛,可用于分离叶绿体以及病毒。

 

    1.利用差速离心进行叶绿体分离:采摘树叶或者白菜叶片100g左右,用水清洗。然后加入1.5倍体积预冷的等渗缓冲液,匀浆完成后用四层纱布过滤。滤液用300*g离心机离心力进行离心,大概三分钟后除去核淀粉与大的组织碎片。倾出上清液,将离心机离心力调至1500*g离心2分钟,重复两次差速循环,即可得到叶绿体的沉淀。

 

2.对病毒的离心分离:大部分病毒的沉降系数在100-2000S之间,密度为2.1-1.6g/cm3之间。如果用差速离心法,按回收沉淀的方法连续做三次循环。最终沉淀中保留的各种颗粒的百分数应为p3。高速离心与低速离心总回收率为p31-p3,将该值对lgs20,w作图,得纯度、回收率都较高的三个差速连续周期的s20,w函数曲线100-2000S范围有几乎相同的回收率及纯度,正好适合病毒的分离。

 

在转子a=3.8cmb=8.1cm中,低速用离心机转速13500 r/min离心30min,高速用转速38000 r/min 120min。在13500r/min下取上清液,上清液在38000r/min沉淀,再作二次高速离心。即可得到前面所说的结果。前面提到的函数曲线对未知病毒的初步分离、提取方案、确定病源方面会有很大帮助。