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速率区带离心法概念简析

    速率区带离心是根据样品中颗粒的沉降速度差异在预形成密度梯度中进行沉降分离的方法。该方法是吧样品铺在一个密度变化范围较小、梯度斜率变化比较平缓的沉降速度移动到梯度中不同位置而形成区带,使不同沉降速度的颗粒得以分离。由于该方法是根据颗粒的沉降速度进行分离,所以梯度的密度应低于被分离颗粒的最小密度。通常使用甩开吊篮转子和区带转子进行,它们的沉降路径长,使颗粒能够充分分开。多使用蔗糖和碘化梯度介质。离心时当沉降最快的样品颗粒到达管底或转子壁形成沉淀前应停止离心。速率区带离心在较强的离心场中进行,分离时间较短,一般不超过4小时即可完成。离心时间长,样品颗粒会全部通过梯度,在转子底部形成沉淀。为了避免这种情况发生,通常在梯度底部加一层密度大于最大颗粒密度的垫层。

    在均匀介质中,颗粒与介质间的相互作用在全部沉降路径是不变的,颗粒沉降速度随着离心场中离心机半径的增加而增加。由于领先颗粒比慢颗粒的半径增加快,它的沉降速度增加更快,领先颗粒加速离开慢颗粒。分辨率提高。而在密度梯度中,介质密度和粘度不断增加,领先颗粒首先进入高密度区,遇到的阻力大,沉降速度快速减慢。梯度斜率越大,降速越明显,不利于提高分辨率,但是若没有密度梯度,所有颗粒都会沉降到管底。同事,对流干扰、转子不变速都会使在均匀介质中已分开的颗粒重新混合。

    速度区带离心机与差速离心相比,分离样品量明显减少,但该法为避免差速离心需要反复操作的过程,一次获得样品中大多数颗粒相互分离,并且分辨率高,可分离沉降系数s值差别百分之而是左右的颗粒。离心后进行部分收集,经过检测确定所需要的成分。