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“眼睛”槽电洗脱法

“眼睛”槽电洗脱法

    本装置如图所示,由左右2个相连的槽组成,槽底均用单层透析袋封严。1侧放切割下来含所需DNA带的凝胶,另l侧为DNA回收槽,回收槽槽底突出部分容积为40ul。本装置回收DNA的特点为,电流只经过“眼镜”槽连通正负极,故洗膜时间短,回收DNA的质量好,回收率也高。

操作步骤:

    (1)在“眼镜”槽两侧突出部分底部,套E单层透析膜,架于电泳槽隔板上,如图,置胶槽在负极,同收槽在正极。

    (2)向电泳槽和眼镜槽中加入0.1×TBE。务必使电泳槽中的液面不高过中隔板,避免左右两槽直接相通。眼镜槽中液面将正好浸没中央桥板,使左右槽相通。

    (3)在长波紫外线灯下,切下所需DNA带的凝胶条置于负极的置胶槽中。

    (4)接通电源,150V电洗脱30分钟,可用手提式长波紫外线灯检查凝胶条中DNA是否已完全洗脱。将正负极倒换,电泳30秒钟。

    (5)关闭电源,小心取下眼镜槽,缓慢吸弃该槽中0 1×TBE,直到液面至回收槽突出部分(回收室)表面,然后将回收槽中的回收液吸出移至1个清洁的Eppendorf管中,加200ul TE,冲洗回收槽,合并回收DNA液。

    (6) DNA回收液经酚像仿标准抽提程序抽提后,用乙醇沉淀回收DNA片段。