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离心机离心后亚细胞部分的分析

    只有当一种分离技术通过离心机分离后得到了完全不含有其它杂质的亚细胞颗粒的制剂时,制剂的性质才可能是属于颗粒本身的。因此,对离心机离心后样品纯度的估价是十分必要的。显微镜的检查已被用来作为分析一个特殊的匀浆技术是否成功,以及离心后某一部分杂质程度的一种手段。但是,不存在可见的杂质并不是纯度的最终证据。离心后样品纯度的定量测定必须通过化学分析(例如蛋白质、DNA)、酶活性鉴定以及可能的话通过免疫学特性的鉴定来得到。

    有二个一般性的假设可以作为解释组织分级分离研究中酶分布类型的根据。第一个假设是,假定某一种特定亚细胞群中的所有的成分都具有相同的酶。第二个假设是,假定每一种酶完全局限在细胞内的一个位置上。如果确实是这样的话,那么这些假定就能使这些酶作为它们各自细胞器的“指示

剂”,例如,细胞色素氧化酶和单胺氧化酶可作为线粒体的指示酶;酸性水解酶可作为溶酶体的指示酶;过氧化氢酶作为过氧物酶体的指示酶;葡糖6—磷酸酯酶作为微粒体膜的一种指示酶。但是,已表明某些酶不完全是分布在一个组分中,例如苹果酸脱氢酶、β—葡糖苦酸酶、NADPH细胞色素c还原

酶。因此,在选择一个酶停为一个特殊的亚细胞组分的指示剂时必须谨慎。而且,不存在指示酶并不能证明不存在一种特殊的细胞器。很可能,从它们各目的细胞器所释放的酶在通过离心机分离过程中以某种方式被抑制或失活。因此,通常在每一个组分中至少要鉴定二种指示酶。