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按细胞沉降速度离心的基本方法

用速度沉降法来离心不同沉降速度的细胞是把细胞悬浮液铺放在液柱上或加入离心机淘洗转子里,在力场作用下沉降速度最快的沉降速度最快的细胞在最上面,离原始位置最远,而沉降速度最慢的细胞在最后面,离原始位置最近。为了防止湍流,液柱最好用PercollFicollNycodenz等配制的梯度柱。有五中类型的速度沉降方法广泛应用于活细胞分离,他们是:

1.单位重力场沉降;

2.Percoll等价值中的等动力梯度沉降;

3.适合于特定细胞的梯度离心;

4.在重定向梯度转子的离心技术;

5.离心淘洗,即逆流离心技术。

前三种方法的主要有点是可以在无菌条件下分离,具有高度的可靠性,所用仪器和试剂各个实验室都可满足,成本较低,适合分离数量不多的细胞,一般在10×106个细胞之内。对比之下在淘洗和重定向梯度离心机转子中离心需要专门培训的技术人员,如果要满足无菌条件,防护过程比较麻烦,但这两种方法适合于分离大量细胞,细胞数量高于30×107个。

速读法离心细胞一般在重力场下火灾非常低转速的离心机里进行。例如在单位重力场下通过Percoll梯度从胶原酶笑话的组织里分离胰岛;分离腹膜坚果细胞;在(10-90g离心加速度下分离枯否氏细胞等。