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鸡新城疫红细胞凝集抑制实验步骤和结果分析

    今天介绍鸡新城疫红细胞凝集抑制实验,该实验主要用到的设备有离心机、采血管、试管等。因为某些病毒(如流感病毒、鸡新城疫病毒)与动物红细胞混悬液混合后能使红细胞发生凝集,但这种凝集作用可为相应的抗体所抑制。因此,可以用已知的免疫血清(抗体)鉴定未知的病毒(抗原)。反之,亦可以用已知的病毒(抗原)来检查病奋血清中的抗体和抗体的抑制价。鸡新城疫红细胞凝集抑制试验方法很多,我们介绍其中的一种:先将实验材料通过离心机离心之后,除去其他成分,完成对实验材料的准备工作。下面详细介绍实验步骤:

 

    1.试验材料的准备:

 

    (])病毒液  取可疑病鸡尸体解剖材料(脾、肝、心、肾等)按上述“鸡胚接种”的方法,接种在鸡胚的绒毛尿囊腔内,3日内死亡的鸡胚,采取其尿囊液就是未知病毒液。

 

    (2)0.5%鸡红细胞悬浮液  在鸡的翅静脉或心脏采血。采血容器事先加入抗凝剂或玻璃珠,使成为抗凝血或脱纤维血。用离心机离心后,沉降的红细胞用生理盐水洗涤3次(离心机离心—倾去上清液—加生理盐水),最后配成0.5%红细胞生理盐水悬浮液。

 

    (3)1:5免疫血清  用鸡新城疫Ⅱ系弱毒疫苗免疫鸡,测定其血清凝集抑制效价达到1:80以上为合格,在使用时其血渍以生理盐水作1:5稀释。

 

    先作红细胞凝集实验,可按下图进行操作。

图一

 

    各管按上述操作混匀后,从10分钟起,隔五分钟观察一次,共观察12次。呈阳性者,红细胞被凝集沉降于管底,阳性者,红细胞不被凝集,沉于管底呈圆点状。

 

    如实验获得阳性结果(一般凝集反应可达第7—9管),证明病料中的确含有病毒,但不能完全确定就是鸡新城疫病毒,因鸡瘟病毒亦可使鸡的红细胞发生凝集,所以,需进一步作“红细胞凝集抑制试验”。

 

    2.红细胞凝集抑制试验:可按下图进行操作。

 

图2

   观察结果的方法同“红细胞凝集试验”,假设本次病料实验结果如下图:

图3

   从上图可以看出,本实验红细胞凝集价为1:320,也就是说,1:320稀释的病毒液每0.25毫升含有一个凝集单位,而本例红细胞凝集抑制实验,可以抑制l6个凝集单位,因血清为1:5稀释,故6x 5=80。所以,本例血清的凝集抑制价为80。试验结果,血清疑集抑制价接近免疫血清的效价,即可判为阳性。

 

    若以已知病毒检查未知血清,其判定标准:血清凝集抑制价1:20以下为阴性,  1:40为可疑,  1:80以上阳性。