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台式高速离心机提取质粒DNA

 

    从大肠杆茵中提取质粒DNA的方法很多,其中的碱性别方法提取质粒是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性存在差异而予以分离的。在强碱性条件下,染色体洲A和质粒DNA均变性(双链解开)。由于质粒DNA是共价闭合环状超螺旋结构,变性后两条互补链不会完全分开。当溶液pH调节到中性时.质粒DNA容易复性并溶解在溶液中,而染色体DNA不容易复性,互相继绕.在利用台式高速离心机进行离心时极易和蛋白质—3Ds复合物等一起沉淀下来。转移出上演液,再用乙醇沉淀出其中的质粒DNA。具体操作步骤如下:

 

    (1)接种一单菌落于100ml LB液体培养基中,加入50μl的氨芐青霉素,37℃振荡培养8—10h,使培养达到饱和状态。

    (2)取1.5ml培养液利用台式高速离心机离心20s,沉淀用100μl GTE悬浮并于室温放置5min。

    (3)加入200μl NaOH/SDS溶液,混匀,于冰上放置5min。

    (4)加入150μl KAc溶液,在旋涡混合器上振荡2s,于冰上放置5min。

    (5)离心3min,然后吸取0.4ml上清液移入干净的微量离心管中,加入0.8ml无水乙醇,室温静置2min。

    (6)室温下通过台式高速离心机进行离心3min,(使用台式高速离心机时一定要注意转速、时间控制以及操作规范)用lml 70%的乙醇洗涤沉淀,然后真空于燥。

    (7)沉淀用30μl dd HO溶解,-20℃保存。