梯度纯化分离细胞器
差速离心可将组织或细胞匀浆分离成沉淀和上清液两部分,根据离心转速和离心时间不同,沉淀和上清液中各部分成分的变化很大。要想得到相对纯的细胞器,通常要进行梯度离心。传统上分了细胞器蔗糖为首选介质,但蔗糖的黏度大,使离心时间延长,高浓度时渗透压高,使细胞密度增大。现在多用碘化密度梯度介质如Iodixanol、Metrizamide和聚乙烯吡咯烷酮包被的二氧化硅颗粒,如Peroll等,由于各细胞器的密度、大小多有差异,故在梯度上易于分离。若有些细胞器无论大小还是密度都比较接近,必须采用变更的方法。 |
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