欢迎进入长沙英泰仪器有限公司官网!为您服务,是我们的职责!

banner
您现在的位置:
首页
-
-
从琼脂糖凝胜中回收DNA片段的原则

新闻资讯

资讯分类

从琼脂糖凝胜中回收DNA片段的原则

  • 分类:新闻资讯
  • 作者:
  • 来源:
  • 发布时间:2020-09-13
  • 访问量:893

【概要描述】 l、去除DNA样品中的杂质

    琼脂糖是从琼脂中提取出来的,其中吉有较多的酸根和羟基多糖。目前大多数级别的璩脂糖中混有硫酸酯多糖,这种物质能抑制基因克隆中使用的多种工具酶的活性,如DNA限制性内切酶、连接酶、激酶及聚合酶。在回收DNA时应尽量减少这些酶抑制剂的污染。不管用哪种方法,回收DNA片段的溶液,要用2.5mol/L醋酸铵和乙醇沉淀再用7。q.乙醇漂洗数次,这样处理,可以很有被地去除一些有害的有机分子和无机盐沉淀。已筏列为实验操作常规。近年来琼脂糖的质量有较大提高,如低融点琼脂糖,不但融点降低到65℃左右,更重要的是,其中DNA工具酶的抑制物含量很少,所以有些低融点琼脂糖可以直接在其溶液中对DNA进行内切酶消化和DNA片段之间的连接反应。

    使用离心机分离提取DNA欢迎选用英泰离心机,现在来电咨询,获取最新优惠!

    2、提高DNA片段的回收率:

    DNA的回收率与DNA片段的大小有一定关系,随着DNA分子量的增大,回收率明显下降.大干20kh时,回收率低于20%。这是由于大的DNA片段与DEAE纤维素纸的结合力强,很难洗脱下来。DNA片段的含量与回收率也有较密切关系,量越少回收率越低,若DNA片段量小于500mg时,几乎很难回收。

    回收DNA片段应该注意以下事项:

    ①提高DNA上样量;

    ②减小DNA同收时的洗脱容积,若容积过大时,可先用正丁醇进行溶液浓缩;

    ③正确选择同收DNA片殷的方法。DEAE纤维素纸电泳法适用于500bp到5kb大小的DNA片段的回收;电洗脱法适用于回收5kb以上的DNA片段,低融点琼脂糖回收法较前两类方法的回收率低,但操作简单,甚至加一定缓冲液融化后即可直接进行反应。

从琼脂糖凝胜中回收DNA片段的原则

【概要描述】 l、去除DNA样品中的杂质

    琼脂糖是从琼脂中提取出来的,其中吉有较多的酸根和羟基多糖。目前大多数级别的璩脂糖中混有硫酸酯多糖,这种物质能抑制基因克隆中使用的多种工具酶的活性,如DNA限制性内切酶、连接酶、激酶及聚合酶。在回收DNA时应尽量减少这些酶抑制剂的污染。不管用哪种方法,回收DNA片段的溶液,要用2.5mol/L醋酸铵和乙醇沉淀再用7。q.乙醇漂洗数次,这样处理,可以很有被地去除一些有害的有机分子和无机盐沉淀。已筏列为实验操作常规。近年来琼脂糖的质量有较大提高,如低融点琼脂糖,不但融点降低到65℃左右,更重要的是,其中DNA工具酶的抑制物含量很少,所以有些低融点琼脂糖可以直接在其溶液中对DNA进行内切酶消化和DNA片段之间的连接反应。

    使用离心机分离提取DNA欢迎选用英泰离心机,现在来电咨询,获取最新优惠!

    2、提高DNA片段的回收率:

    DNA的回收率与DNA片段的大小有一定关系,随着DNA分子量的增大,回收率明显下降.大干20kh时,回收率低于20%。这是由于大的DNA片段与DEAE纤维素纸的结合力强,很难洗脱下来。DNA片段的含量与回收率也有较密切关系,量越少回收率越低,若DNA片段量小于500mg时,几乎很难回收。

    回收DNA片段应该注意以下事项:

    ①提高DNA上样量;

    ②减小DNA同收时的洗脱容积,若容积过大时,可先用正丁醇进行溶液浓缩;

    ③正确选择同收DNA片殷的方法。DEAE纤维素纸电泳法适用于500bp到5kb大小的DNA片段的回收;电洗脱法适用于回收5kb以上的DNA片段,低融点琼脂糖回收法较前两类方法的回收率低,但操作简单,甚至加一定缓冲液融化后即可直接进行反应。

  • 分类:新闻资讯
  • 作者:
  • 来源:
  • 发布时间:2020-09-13
  • 访问量:893
详情

 l、去除DNA样品中的杂质

    琼脂糖是从琼脂中提取出来的,其中吉有较多的酸根和羟基多糖。目前大多数级别的璩脂糖中混有硫酸酯多糖,这种物质能抑制基因克隆中使用的多种工具酶的活性,如DNA限制性内切酶、连接酶、激酶及聚合酶。在回收DNA时应尽量减少这些酶抑制剂的污染。不管用哪种方法,回收DNA片段的溶液,要用2.5mol/L醋酸铵和乙醇沉淀再用7。q.乙醇漂洗数次,这样处理,可以很有被地去除一些有害的有机分子和无机盐沉淀。已筏列为实验操作常规。近年来琼脂糖的质量有较大提高,如低融点琼脂糖,不但融点降低到65℃左右,更重要的是,其中DNA工具酶的抑制物含量很少,所以有些低融点琼脂糖可以直接在其溶液中对DNA进行内切酶消化和DNA片段之间的连接反应。

    使用离心机分离提取DNA欢迎选用英泰离心机,现在来电咨询,获取最新优惠!

    2、提高DNA片段的回收率:

    DNA的回收率与DNA片段的大小有一定关系,随着DNA分子量的增大,回收率明显下降.大干20kh时,回收率低于20%。这是由于大的DNA片段与DEAE纤维素纸的结合力强,很难洗脱下来。DNA片段的含量与回收率也有较密切关系,量越少回收率越低,若DNA片段量小于500mg时,几乎很难回收。

    回收DNA片段应该注意以下事项:

    ①提高DNA上样量;

    ②减小DNA同收时的洗脱容积,若容积过大时,可先用正丁醇进行溶液浓缩;

    ③正确选择同收DNA片殷的方法。DEAE纤维素纸电泳法适用于500bp到5kb大小的DNA片段的回收;电洗脱法适用于回收5kb以上的DNA片段,低融点琼脂糖回收法较前两类方法的回收率低,但操作简单,甚至加一定缓冲液融化后即可直接进行反应。

扫二维码用手机看

联系我们

地址:长沙市望城区马桥河路联东U谷A3栋、B3栋

长沙英泰仪器有限公司

微信公众号