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• 发布时间：2020-09-13
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【概要描述】 本法利用琼脂糖凝胶溶于Nal，其中DNA可专一性地与玻璃粉末结合，经洗涤去杂质后，再用低盐洗脱液从玻璃粉末上将DNA洗脱下来，达到回收DNA片段的目的。溶液中的DNA也可用本法纯化，如准备作序列分析的M13DNA。

试剂：

    预洗过的325目粉状燧石玻璃粉末（IBI公司）

    TF缓冲液

    碘化钠溶液：

    90.8g Nal

    15g Na2S

    用水调容积至1 COOmlWhatman 1号滤纸或0.45um滤膜过滤，再加0.5g碘化钠至饱和，4℃下，用铝铂纸包住避光保存。

    乙醇洗涤溶液：

    50ml乙醇中古：

    20rrmoUL Tns (pH7.4)

    1mmol/L EDTA

    0.1mol/L Nacl

    于-20℃储存。

    3mol/L NaAc (pH7.4)

    乙醇

操作步骤：

    (1)琼脂糖凝胶电泳分离DNA后，在长波紫外线灯下，切下含所需DNA带的凝胶条（体积尽可能小）。

    (2)按每克琼脂糖凝胶条，加2ml Nal溶液的比例加入Nal溶液．37℃保温60分钟溶解凝胶。应注意：保温过程应避光，TBE配制的凝胶不易溶解。

    (3)用水将玻璃粉末稀释成50％的糊状(v/v)，摇匀，按每1ug DNA加3ul玻璃糊状液的比例，向溶解好的凝胶DNA混合液中加入玻璃糊状液混匀，冰浴放置90分钟。

    (4) EppendoIf离心机，5000r/min，4℃离心1分钟，弃上清。

    (5)加入4℃预冷的40ul乙醇洗涤溶液，悬浮玻璃粉末，5000r/min，离心1分钟，重复漂洗2次。

    (6)在玻璃沉淀物中，加入25ul TE混匀，37℃保温30分钟。

    (7)5 000r/min，离心1分钟，上清液移入1个清洁的Eppendorf管中，此时样品可再用乙醇沉淀。

    (8)加3pel 3moUL NaAe，75yl乙醇混合，于冰上10分钟。

    (9)12 000r/min，4℃离心10分钟，倾弃液体，沉淀室温挥发乙醇后，溶于适当容积的T缓冲液中。

注意事项：

    (1)若选用玻璃粉末回收法进行凝胶电泳分离DNA时，不能使用TBE缓冲液，因为硼酸缓冲液配制的凝胶（琼脂糖或丙烯酰胺）在Nal溶液中均不能完全溶解。

    (2)步骤(3)中加入过量的玻璃粉末，并不能增加DNA的回收率。