鸡新城疫红细胞凝集抑制实验步骤和结果分析

今天介绍鸡新城疫红细胞凝集抑制实验，该实验主要用到的设备有离心机、采血管、试管等。因为某些病毒(如流感病毒、鸡新城疫病毒)与动物红细胞混悬液混合后能使红细胞发生凝集，但这种凝集作用可为相应的抗体所抑制。因此，可以用已知的免疫血清(抗体)鉴定未知的病毒(抗原)。反之，亦可以用已知的病毒(抗原)来检查病奋血清中的抗体和抗体的抑制价。鸡新城疫红细胞凝集抑制试验方法很多，我们介绍其中的一种：先将实验材料通过离心机离心之后，除去其他成分，完成对实验材料的准备工作。下面详细介绍实验步骤：

1．试验材料的准备：

(])病毒液  取可疑病鸡尸体解剖材料(脾、肝、心、肾等)按上述“鸡胚接种”的方法，接种在鸡胚的绒毛尿囊腔内，3日内死亡的鸡胚，采取其尿囊液就是未知病毒液。

(2)0.5％鸡红细胞悬浮液  在鸡的翅静脉或心脏采血。采血容器事先加入抗凝剂或玻璃珠，使成为抗凝血或脱纤维血。用离心机离心后，沉降的红细胞用生理盐水洗涤3次(离心机离心—倾去上清液—加生理盐水)，最后配成0.5％红细胞生理盐水悬浮液。

(3)1:5免疫血清  用鸡新城疫Ⅱ系弱毒疫苗免疫鸡，测定其血清凝集抑制效价达到1:80以上为合格，在使用时其血渍以生理盐水作1:5稀释。

先作红细胞凝集实验，可按下图进行操作。

图一

各管按上述操作混匀后，从10分钟起，隔五分钟观察一次，共观察12次。呈阳性者，红细胞被凝集沉降于管底，阳性者，红细胞不被凝集，沉于管底呈圆点状。

如实验获得阳性结果(一般凝集反应可达第7—9管)，证明病料中的确含有病毒，但不能完全确定就是鸡新城疫病毒，因鸡瘟病毒亦可使鸡的红细胞发生凝集，所以，需进一步作“红细胞凝集抑制试验”。

2．红细胞凝集抑制试验：可按下图进行操作。

图2

观察结果的方法同“红细胞凝集试验”，假设本次病料实验结果如下图：

图3

从上图可以看出，本实验红细胞凝集价为1:320，也就是说，1:320稀释的病毒液每0.25毫升含有一个凝集单位，而本例红细胞凝集抑制实验，可以抑制l6个凝集单位，因血清为1:5稀释，故6x 5＝80。所以，本例血清的凝集抑制价为80。试验结果，血清疑集抑制价接近免疫血清的效价，即可判为阳性。

若以已知病毒检查未知血清，其判定标准：血清凝集抑制价1:20以下为阴性，  1:40为可疑，  1:80以上阳性。