自制快速高效电洗脱法

上述电洗脱法中，透析袋电泳洗脱法容积较大，挖槽法需不时吸出槽内液体，其它方法皆需购买特殊的回收装置，下面介绍一种自制的简单体系，方便、实用、经济，不受条件限制，回收率高（达80%）、质量好。

操作步骤：

(1)在长波紫外线灯下确定并切下所需DNA带的凝胶条。

(2)将凝胶条放人1个l.5ml的微量移液枪枪头中，0 6%的琼脂糖（用相应的1×电泳缓冲液配制），化胶后冷却至50℃，加入含凝胶条的l.5ml枪头中，使0.6%琼脂糖液面高出凝胶条l- 2mm，避免产生气泡，室温下使琼脂糖凝固。1.5ml枪头中灌人的琼脂糖量决定于该枪头顶端所需留下多少空间，可根据所需洗脱的DNA量多少而定，一般为300/u左右。

(3)切除灌好胶的1.5ml枪头尖端(2cm左右)，顶端加入l×电泳缓冲液（TBE、TAE均可）。

(4)取另1个1.5ml枪头，切除尖端部分3.2cm左右前端放置1个单层透析膜，插入步骤3准备好的枪头顶端，避免产生气泡，检查是否有液体从透析袋周围析漏。

(5)将准备好的电洗脱装置，浸于电泳槽的电泳缓冲液液面以下，用胶布固定。

(6)接通电源，100V、150mA电泳15- 20分钟。DNA应全部迁移至凝胶和透析袋之间的溶液中可用长波紫外线灯监测，倒置正、负极电泳30秒。

(7)停止电泳，取出电洗脱装置，用手纸吸干外面的液体，垂直（凝胶端朝下）小心取出上端1.5ml枪头，去掉透析袋，吸出电洗脱液移人另1个新Eppendorf管中。

(8)用2 5mol/L醋酸铵，2倍容积乙醇沉淀DNA，DNA溶于TE中备用。

注意事项：

(1)步骤2操作中，可以先切除1.5ml枪头尖端，然后用胶布封住切口，灌人适量0.6%琼脂糖，使液面高于原凝胶条1 - 2mm，并且留出300 ~ 400ul体积的顶端空隙，凝固后，加入300~400ul 1×TBE，再去掉尖端封口的胶布。

(2)将自制电洗脱装置在电泳槽中固定，可以切下1长块1.5ml枪头贮存盒中的插板，先用氯仿将插板粘合固定在电泳槽中，然后将自制电洗脱装置插入板中。