玻璃粉末洗脱法回收DNA片段

本法利用琼脂糖凝胶溶于Nal，其中DNA可专一性地与玻璃粉末结合，经洗涤去杂质后，再用低盐洗脱液从玻璃粉末上将DNA洗脱下来，达到回收DNA片段的目的。溶液中的DNA也可用本法纯化，如准备作序列分析的M13DNA。

试剂：

预洗过的325目粉状燧石玻璃粉末（IBI公司）

TF缓冲液

碘化钠溶液：

90.8g Nal

15g Na2S

用水调容积至1 COOmlWhatman 1号滤纸或0.45um滤膜过滤，再加0.5g碘化钠至饱和，4℃下，用铝铂纸包住避光保存。

乙醇洗涤溶液：

50ml乙醇中古：

20rrmoUL Tns (pH7.4)

1mmol/L EDTA

0.1mol/L Nacl

于-20℃储存。

3mol/L NaAc (pH7.4)

乙醇

操作步骤：

(1)琼脂糖凝胶电泳分离DNA后，在长波紫外线灯下，切下含所需DNA带的凝胶条（体积尽可能小）。

(2)按每克琼脂糖凝胶条，加2ml Nal溶液的比例加入Nal溶液．37℃保温60分钟溶解凝胶。应注意：保温过程应避光，TBE配制的凝胶不易溶解。

(3)用水将玻璃粉末稀释成50％的糊状(v/v)，摇匀，按每1ug DNA加3ul玻璃糊状液的比例，向溶解好的凝胶DNA混合液中加入玻璃糊状液混匀，冰浴放置90分钟。

(4) EppendoIf离心机，5000r/min，4℃离心1分钟，弃上清。

(5)加入4℃预冷的40ul乙醇洗涤溶液，悬浮玻璃粉末，5000r/min，离心1分钟，重复漂洗2次。

(6)在玻璃沉淀物中，加入25ul TE混匀，37℃保温30分钟。

(7)5 000r/min，离心1分钟，上清液移入1个清洁的Eppendorf管中，此时样品可再用乙醇沉淀。

(8)加3pel 3moUL NaAe，75yl乙醇混合，于冰上10分钟。

(9)12 000r/min，4℃离心10分钟，倾弃液体，沉淀室温挥发乙醇后，溶于适当容积的T缓冲液中。

注意事项：

(1)若选用玻璃粉末回收法进行凝胶电泳分离DNA时，不能使用TBE缓冲液，因为硼酸缓冲液配制的凝胶（琼脂糖或丙烯酰胺）在Nal溶液中均不能完全溶解。

(2)步骤(3)中加入过量的玻璃粉末，并不能增加DNA的回收率。