细胞凋亡的生物化学研究方法

细胞凋亡时主要生物化学特征是其染色质发生浓缩，染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂，形成50 ~ 300kb长的DNA片段，或180 ~ 200bp整数倍的寡核苷酸片段，在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱(称为DNA ladder)。英泰仪器是专业生产用于细胞分离的高速离心机的离心机厂家。

细胞经处理后，采用常规方法分离提纯DNA后，进行琼脂糖凝胶电泳和溴化己啶染色，在凋亡细胞群中则可观察到典型的DNA ladder.如果细胞量很少，还可在分离提纯DNA后，用32P- ATP和脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)使DNA标记，然后进行电泳和放射自显影，观察凋亡细胞中DNA ladder的形成。

此外，在正常细胞中，其核是完整的，胞浆中不会产生低分子量的DNA，而在凋亡细胞中，其核发生裂解，细胞浆中可产生低分子量的DNA。因此，通过测定比较细胞内的DNA变化也是鉴别群体凋亡细胞的重要生物化学方法。

欲测定细胞内的DNA的变化，可采用下述不同的方法进行：

①用1H—TdR或125l - UdR预先标记DNA，细胞经不同处理后，用离心法使高、低分子量的DNA分开，分别测定其放射活性，通过计算高、低分子量DNA的放射活性计算凋亡细胞的百分率

②用3H—TdR预先标记DNA，细胞经不同处理后，用玻璃纤维膜将高、低分子量DNA分开，或用碱性溶液法将高、低分子量DNA分开，然后分别测定其放射活性，通过计算高、低分子量DNA的放射活性计算凋亡细胞的百分率；

③用非同位素BrdU预先标记DNA，细胞经不同处理后，用离心法将高、低分子量DNA分开，用酶联免疫吸附法测定上清液中的低分子量DNA，以此代表凋亡细胞的多少。

上述方法都是用来测定细胞群中凋亡细胞的，下面介绍四种不同的生物化学研究方法，同时介绍了细胞凋亡时钙离子浓度变化的测定方法。