浏览数量: 101 作者: 英泰离心机 发布时间: 2020-09-13 来源: 英泰运营部
细胞凋亡时主要生物化学特征是其染色质发生浓缩,染色质DNA在核小体单位之间的连接处断裂,形成50 ~ 300kb长的DNA片段,或180 ~ 200bp整数倍的寡核苷酸片段,在凝胶电泳上表现为梯形电泳图谱(称为DNA ladder)。英泰仪器是专业生产用于细胞分离的高速离心机的离心机厂家。
细胞经处理后,采用常规方法分离提纯DNA后,进行琼脂糖凝胶电泳和溴化己啶染色,在凋亡细胞群中则可观察到典型的DNA ladder.如果细胞量很少,还可在分离提纯DNA后,用32P- ATP和脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)使DNA标记,然后进行电泳和放射自显影,观察凋亡细胞中DNA ladder的形成。
此外,在正常细胞中,其核是完整的,胞浆中不会产生低分子量的DNA,而在凋亡细胞中,其核发生裂解,细胞浆中可产生低分子量的DNA。因此,通过测定比较细胞内的DNA变化也是鉴别群体凋亡细胞的重要生物化学方法。
欲测定细胞内的DNA的变化,可采用下述不同的方法进行:
①用1H—TdR或125l - UdR预先标记DNA,细胞经不同处理后,用离心法使高、低分子量的DNA分开,分别测定其放射活性,通过计算高、低分子量DNA的放射活性计算凋亡细胞的百分率
②用3H—TdR预先标记DNA,细胞经不同处理后,用玻璃纤维膜将高、低分子量DNA分开,或用碱性溶液法将高、低分子量DNA分开,然后分别测定其放射活性,通过计算高、低分子量DNA的放射活性计算凋亡细胞的百分率;
③用非同位素BrdU预先标记DNA,细胞经不同处理后,用离心法将高、低分子量DNA分开,用酶联免疫吸附法测定上清液中的低分子量DNA,以此代表凋亡细胞的多少。
上述方法都是用来测定细胞群中凋亡细胞的,下面介绍四种不同的生物化学研究方法,同时介绍了细胞凋亡时钙离子浓度变化的测定方法。